将土样悬浮于灭菌后的生理盐水中，并进行梯度系列稀释后，按常规方 法涂黄原胶平板，于30°C培养箱中培养24小时。分别挑出单个菌落的一部 分接种于黄原胶平板，于30°C培养箱培养24小时，作为保留菌种；另一部 分接种于选择性液体培养基，并于30°C振荡培养(200r/min)，观察培养基的 粘度变化。经对培养过程中培养液下降程度和速度的比较，选出一株对黄原 胶降解能力最强的菌落作为研究用菌，命名为XT-11[1]。

2.2分泌黄原胶酶菌株的常规鉴定

细菌的常规鉴定法，在着重于细菌的表观特征描述的基础上，结合化学 分类、数值分类等各个方面进行鉴定。用于进行鉴定的菌株首先必须为纯菌。 通常所说的纯菌，一般是菌落形态一致、菌体细胞形态一致的菌株。其次要 求菌种必须生长代谢活跃，处于休眠或衰退的菌种则不适于此种鉴定。虽然 细菌的常规鉴定方法比较传统，耗费的时间较长，同时检测项目较多，比较 复杂，但由于该方法能从多个方面对细菌进行分析，故一直被用来进行细菌 鉴定。

2.2.1形态特征

试验方法：

采用革兰氏染色，待鉴定菌株于黄原胶液体培养基中30°C培养12〜36小 时，光学显微镜下观察个体形态并测定菌体大小。同时用上述培养物，采用 电子显微镜观察菌体形态、鞭毛着生情况和细胞表面结构；于牛肉膏琼脂、 营养琼脂、LB琼脂、蛋白胨酵母音琼脂等4种固体培养基上，30°C培养48

小时后观察菌落的颜色和形态并测定菌落大小[2’'

结果与讨论：

对分离到一株能够分泌降解黄原胶酶的菌株XT-11，在光学显微镜下观 察发现(图2-1)，该菌株在幼龄时期为杆菌，大小约为0.4M)加111>^0~2邶!11， 呈直杆形或稍弯曲，但在1周以上的培养物中，只存在〇.5nmx〇.5pm左右的 类球状细胞。负染电镜照片显示其侧生鞭毛（图2-2)。革兰氏染色阴性，抗 酸性染色阴性。

XT-11菌株于固体平板培养基上3CTC培养>4天，菌落呈圆形，凸起， 较光滑，乳白色，湿润，不透明，边缘完整。

图2-1 XT-11杆状与球状菌体形态图2-2 XT-11的负染电镜扫描照片

Figure 2-1 Rod and round cell of strain XT-11

Figure 2-2 Electron micrograph of negative-stained XT-11 cell

■2.2.2运动性试验 试验方法：

运动性检査采用两种方法进行。一种是在检査葡萄糖氧化发酵试验时， 通过半固体穿刺同时进行，另一种通过水浸片法检查[4】。水浸片法具体操作 如下：在LB液体培养基中将XT-11菌株于30T：振荡(150r/min)培养24小时 后，取1滴菌悬液置于载玻片上，加盖盖玻片后直接在高倍镜下观察^«观察到

快速移动的菌体则表明待测菌株具有运动能力。

结果与讨论r

XT-11菌株属于兼性厌氧菌，按Cappuccino的方法w，在整个琼脂试管 中基本呈均匀生长；半固体穿刺培养和悬滴镜检结果表明该菌体无运动性。

2.2.3生长条件试验

试验方法：

用721型分光光度计在660 nm处测量最适盐浓度、最适温度和最适pH 等的生长情况。

结果与讨论：

XT-11菌株仅能在40 mg/L以下浓度的NaCl上生长；其生长温度范围为

12。035 °C，最适生长温度为30 其生长的pH范围为4-8,最适pH为

2.2.4芽孢试验 试验方法：

采用水浴80 保温10 min或用与培养液等量的95%乙醇于20 °C保温 45 min的处理方法检验芽孢是否存在。

结果与讨论：

经水浴80°C保温lOmin或乙醇处理后，XT-11菌株不能生长，说明无芽

孢生成。 2.2.5碳源的利用 试验方法：

硫酸铵2mg/L，磷酸二氢钠5mg/L,磷酸氢二钾0.5mg/L,七水合硫酸镁

0.2 mg/L,氯化钙0.1 mg/L。分别添加葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、D-半乳 糖、D-木糖、D-阿拉伯糖、山梨糖、甘露糖、鼠李糖、果糖、D-棉子糖、菊

糖、纤维二糖、D-岩藻糖，并使终浓度为20 mg/L,观察测定菌株是否生长。 结果与讨论：

XT-11菌株可以利用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、D-半乳糖、D-木糖、 D-阿拉伯糖、山梨糖、甘露糖、鼠李糖、果糖、D-棉子糖、菊糖、纤维二糖、 D-岩藻糖，其既不产酸也不产气。

2.2.6生理生化特征

试验方法：

在营养琼脂上，于3(TC活化培养24小时后，按文献所述方法[2’3]，对该 培养物分别进行葡萄糖氧化发酵、柠樣酸盐利用、脲酶、卵磷脂水解、还原 硝酸盐、产吲哚、甲基红（M.R)、产H2S、明胶液化、七叶苷水解、厌氧生 长及淀粉水解等生理生化试验。

结果与讨论：

1)XT-11菌株的氧化酶反应为阴性，而过氧化氢酶反应为阳性；不呈现 卵磷脂酶和脲酶活性。

2)XT-11菌不能水解淀粉、纤维素、七叶苷、酪素、明胶和油脂，但能 够分解果胶；甲基红试验阳性，石蕊牛奶反应为暗红色产酸；能够由色 氨酸生成吲哚并且能够产生硫化氢；硝酸盐还原呈阴性反应。对半乳糖、 乳糖、蔗糖和葡萄糖的氧化发酵实验检测发现，

3)7CT-11菌对上述各种糖均属发酵型代谢。

4)XT-11菌不能利用柠檬酸盐，在以葡萄糖为唯一碳源和氮源的培养基 上也不能生长。

2.3分泌黄原胶酶菌株的BIOLOG-GP鉴定

早在七十年代中期，一些国外公司就研究出借助生物信息编码鉴定细菌 的新方法。这些技术的应用，为微生物检验工作提供了一个简便、科学的鉴

定程序，大大提高了细菌鉴定的准确性。目前，微生物编码鉴定技术已经得 到普遍应用，并早己商品化和形成独特的不同细菌鉴定系统。如API、 Enterotube和BIOLOG-GP等系统。微生物鉴定的自动化技术近十几年得到了 'ft速发展。目前自动化微生物鉴定和药敏分析系统己在世界范围内微生物分 析实验室中得到了广泛应用。

BIOLOG-GP细菌鉴定系统通过在一块鉴定板上使用95种碳源进行实验 (如图2-3)。微生物利用碳源进行呼吸时，会将四嗤类氧化还原染色剂，从 无色还原成紫色，从而在微生物的鉴定板上形成该微生物特征性的反应模式 或“指纹”，通过纤维光学读取设备一一读数仪来读取颜色变化，由于对光密 度的吸收值的差异，计算机通过概率最大模拟法，并将该反应模式或“指纹” 与数据库相比较，将目标微生物与数据库的相关菌的特征数据进行比对，对 分析的微生物进行最大限度的匹配，可以在瞬间得到鉴定结果，确定所分析 的微生物的属名或种名[5]。利用天津市出入境检验检疫局BIOLOG 4.2细菌自 动鉴定分析系统，对黄原胶降解菌株XT-1I进行了检测。