黄原胶又称为汉生胶，是一种用途广泛的微生物胞外多糖。它无味、无臭、无毒、食用安全，是目前国际 上集增稠、悬浮、乳化、稳定于一体，性能最优越的生物胶[1]，在石油工业、食品工业、医药、化工等诸多行业 获得了广泛的应用[2]。目前，国内黄原胶发酵水平与国外先进水平相比尚有较大差距[3]，利用何种有效的 途径提高黄原胶的产量与多糖的品质，节约生产成本，成为近年来黄原胶研究的主要方向[4]。
甘蔗糖蜜是糖厂的主要副产品，成分非常复杂并且其含糖量仍非常高，蔗糖和还原糖占30% ~50%，是 发酵、食品、饲料和建材工业中质优价廉的原料[5]，中国是甘蔗种植大国，甘蔗糖蜜原料非常充足，用糖蜜原 料发酵生产黄原胶，可降低成本，节约能源，具有一定的经济及社会效益,实验通过微波对黄原胶生产菌进行 诱变育种，以期得到能利用甘蔗糖蜜高效发酵生产黄原胶的优良生产菌种。
1材料与方法
1.1实验材料
1. 1. 1菌种
野油菜黄单胞菌(如―camPest心）20183,购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC)。
1.1.2仪器
YP202N电子天平(上海精密科学仪器有限公司），SW - CL -2FD洁净工作台（苏州安泰空气技术有限 公司），GNP -9160BS - IE隔水式恒温培养箱（上海新苗医疗器械制造有限公司），CS101 - AB型电热鼓风干 燥箱（中华人民共和国重庆试验设备制造），K021B - BF美的微波炉（广东美的微波炉制造有限公司），TXQ -LS - s n全自动立式电热压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），糖用锤度计（浙江余桃仪 表二厂）。
1.1.3培养基
糖蜜由广西宜州石别糖厂提供，使用前按文献[6 ]处理得糖蜜酸化水解液备用;其余试剂均为分析纯
试剂。
菌种活化培养基:蛋白胨5 g，牛肉膏3 g,氯化钠5 g,琼脂15 g,蒸馏水1 L，PH值为7.0。
菌种培养液:蛋白胨5 g,牛肉膏3 g，氯化钠5 g,蒸馏水1 L,pH值为7.0。
平板培养基：蛋白胨5 g,牛肉膏3 g,氯化钠5 g,琼脂15 g,8°Bx糖蜜水解液1 L，PH值为7.0。
种子培养液:蛋白胨8 g,磷酸二氢钾0.2 g，硫酸镁0.2 g，8°Bx糖蜜酸化水解液1 L，PH值为7.0。
摇瓶发酵培养基:蛋白胨5g，磷酸二氢钾〇.2g,硫酸镁0.2g，柠檬酸1 g,10°Bx糖蜜酸化水解液1 L， pH值为7.0。
1.2实验方法 1. 2. 1菌种活化
将保藏菌种转接至活化培养基中,28尤恒温培养36 h,使菌种活化，用于下一步实验。
1. 2. 2微波诱变实验
(1)活化菌株生长曲线的测定。
取斜面活化菌株一环至菌种培养液中，28 t、180 r/min摇床培养，从6 h后开始，每隔3 h取样600 mn 测其吸光度M)值，以培养时间为横坐标、吸光度M)值为纵坐标绘菌株生长曲线，根据生长曲线选择处于对 数生长期的细胞进行诱变实验。
(2)微波诱变致死率曲线。
取10 mL处于对数生长期的菌种接人装有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中，并用玻璃珠振荡，打散菌 落。使用十倍稀释法稀释菌悬液，用血细胞计数法计数，选取约1〇8个孢子/mL孢子菌悬液，分装5 mL至无 菌离心管中，以900 W功率微波炉进行辐射处理，每次照射10 s后使平皿冷却，消除热效应，再进行照射，并 将照射时间累计[7]。按照常规方法稀释浓度梯度涂布筛选平板，根据菌落数计算致死率并绘画致死曲线。
(3 )黄原胶菌株诱变突变株筛选。
根据致死率曲线，以致死率为70% ~ 80%的诱变剂量处理菌株[8]，经过辐射后涂布平板，在28丈下培 养3 d，从平板上挑取大而圆的菌落接到摇瓶种子培养基内，置180 r/min摇床28 t恒温培养36 h，然后以 10%接种量，装液量200 mL/500 mL三角瓶，28 t恒温摇床180 r/min培养72 h进行摇瓶复筛。
(4)遗传稳定性实验。
将选育出的产胶量最高的菌株接种于活化培养基上传代，共传六代,相同条件下发酵培养，测黄原胶产 胶量,检测诱变所得黄原胶菌株的遗传稳定性。
1. 2. 3黄原胶提取方法[9]
将95%乙醇和发酵液按1:2比例混合，室温下搅拌20 min,过滤，得到黄原胶沉淀置于烘箱中，60 T烘 干至恒重称量。
2结果与分析
2.1实验菌株生长曲线
菌种接种到均匀的液体培养基后，细菌以二分裂繁殖。经过迟缓期进人对数生长期，并以最大的速率生 长和分裂，导致细菌数量呈对数增加，此时细菌生长呈平衡生长，即细胞内各成分按比例有规律地增加，所有 细胞组分呈彼此相对稳定速度合成。对数生长期细菌的代谢活性高而稳定，细胞大小比较一致，生活力强， 易变异，重复性较好。由图1可知，该菌株对数生长曲线为9 ~21 h,24 h后进入稳定期,所以选择培养18 H 的菌液进行诱变处理。
微波诱变是一种新兴的物理诱变育种技术，且设备相对简单，易于操作，安全高效。微波辐射会产生热 效应，引起生物迅速升温并导致各种生物功能产生变化。随着微波时间的延长，致死率逐渐增大。由图2可 知，当辐射时间为60 s时，致死率在70% -80%之间。根据诱变的机制，菌株的正突变几率可能性最大，因 此选用60 s作为诱变筛选的辐射时间。
图2微波诱变致死率曲线
2.2.2黄原胶菌株诱变突变株筛选
以单位体积发酵液黄原胶的产量为筛选指标，筛选到1株黄原胶产量有较大提高的正突变株X12,由表 1可知，该菌株黄原胶的产量达到了 22. 14 g/L,是未诱变菌株的1. 53倍。
表1微波诱变后菌株的黄原胶产量对比
菌株编号菌株20183 (诱变前）突变株X12(诱变后）
黄原胶产量14 51 g/L22. 14 g/L
2.2.3遗传稳定性实验
为检验突变菌株X12发酵产胶的稳定性，实验将突变菌株连续传代6次，每代按初步确定的发酵条件 测定其黄原胶产量。实验结果见表2，实验结果表明，突变菌株经过微波辐射诱变后，基因发生了突变，总产 量得到提高且产量基本维持在22. 14 g/L左右，有较好的遗传稳定性。
表2突变菌株X12传代实验结果
传代次数〇123456
黄原胶产量22. 14g/L 22. 56 g/L22. 64 g/L19. 87g/L 21.32 ^/L20. 91 g/L21.73g/L
甘蔗糖蜜来源广，价格低，是重要的工业发酵原料，实验通过微波诱变处理保藏野油菜黄单胞菌20183, 筛选到一株能以甘蔗糖蜜作为发酵原料生产黄原胶的优良正突变株XI2,该菌株的黄原胶产量达22. 14 g/L，是未诱变菌株的1. 53倍,传代实验表明，该菌株遗产性状稳定。
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