研究了黄原胶和键那绿B(JGB)结合的共振散射光谱.实验结果表明，在pH 9 62水溶液中，黄原胶与染料
探针JGB发生静电作用，产生了以328.5 nm为特征峰的共振光散射（RLS)光谱.此波长下，在一定黄原胶浓度范
围内，增强的共振光散射强度（A/RLS)与其具有线性关系.据此建立了痕量黄原胶的共振光散射分析方法.当JGB
的浓度为2 2X 10-5 mol/L时，测定黄原胶的检测限为12 24ng/mL.
黄原胶，又称汉生胶，其结构如图1所示，是野油菜黄单孢杆菌分泌的一种胞外酸性多糖，具有阴离 子属性和良好的水溶液性[1].黄原胶在食品工业、精细化工、石油采矿、医药工业等领域有广泛的应用.在 油田应用和实验研究中，准确测定黄原胶十分重要.黄原胶的测定方法有苯酚-磺酸法、色谱法、放射性 标记法、有机碳含量测定法、沉淀法、粘度法、咔唑法等[2].这些方法有的费时，有的干扰大，有的测定灵 敏度低.本研究建立共振光散射(RLS)法测定黄原胶浓度.RLS方法具有操作简单，灵敏度高的特点，已 广泛地应用于生物大分子[3、金属离子[4、卤离子[5]、生化药物[3、纳米粒子[7]、表面活性剂[8]、细菌[9等 的检测.
键那绿B(JGB)是一种阳离子型染料，可作为共振光散射探针，对核酸等生物大分子进行检测|10.本 研究发现，在碱性条件下，醌亚胺类阳离子染料JGB和黄原胶通过静电引力结合产生増强的共振光散射， 最大散射峰位于32& 5 nm处，且RLS増强程度与黄原胶浓度在一定范围内呈线性关系.在此基础上建立 了测定黄原胶的RLS方法.
1实验部分
1. 1仪器和试剂
F2500型荧光分光光度计（日本日立公司)，UV 8500型紫外可见分光光度计(香港天美公司)，PHS 3C型酸度计(成都方舟科技开发公司)，MVS 1型漩涡混合器(北京北德科学器材有限公司）.
黄原胶溶液：称取0. 050 0 g黄原胶固体粉末，溶解于二次蒸馏水中配制成浓度为200〜/mL的储备 液，取25. 00 mL稀释至500i 0 mL,得10. 0 Mg/mL的工作液，置于冰箱中以备用.
JGB(上海第三化学试剂厂，上海)储备液是直接将晶体溶于水配成，浓度为2 0X10-4mol/L;用Brit ton Robinson(BR)缓冲溶液来控制体系的酸度，用1. 0 mol/L的NaCl溶液调节溶液的离子强度.所用试 剂均为分析纯；实验中所用的水均为二次蒸馏水.
1.2实验方法
在10 mL比色管内依次加入1. 0 mL pH 9. 62的BR缓冲溶液、一定量的黄原胶溶液、适量的染料溶 液，每加入一种试剂后用漩涡混合器混合均匀，最后用二次水稀释定容至刻度线.在荧光分光光度计上以 同步扫描激发和发射单色器以获得RLS光谱，于X(m=X(I=32& 5 nm处测定复合物的共振光散射 强度I和试剂的空白/。，A/=/- I。.激发和发射狭缝宽度均为5. 0 nm.
2结果与讨论
2 1 JGB黄原胶体系的RLS光谱特征
图2是试剂空白和JGB-黄原胶结合物的RLS光谱.由图2可知，当JGB与黄原胶在溶液中单独存在 的时候，其在220~ 600 nm的波长范围内RLS信号均较弱(线1和线2)，但少量黄原胶加入后，JGB -黄原 胶体系的RLS信号増强，最大散射峰位于328. 5 nm,此外在455. 0 nm, 492 0 nm处均能得到増强信号. 在整个扫描范围内，随着黄原胶浓度的増加，RLS强度増加，表明带正电的JGB于带负电的黄原胶之间发 生了作用.由于黄原胶具有阴离子属性，JGB带正电荷，二者之间通过静电作用，形成了复合物，产生了増 强的RLS.
22实验条件的优化
2 2 1试剂加入顺序的影响
试剂的加入顺序对体系的影响较大，实验表明采用BRxanthanJGB顺序比较好，此时获得的RLS强 度大且数值稳定.首先混合缓冲溶液和黄原胶，可以使黄原胶所带的酸性基团在碱性的环境中更好的离 解増加了体系的有效电荷，容易与JGB形成缔合物，获得较强的RLS信号.
2 2 2 pH值的影响
图3的pH影响反映了黄原胶与染料分子之间的静电作用力的影响.带负电荷的黄原胶与带正电荷的 JGB二者在偏碱性环境下产生较强的RLS信号.如图3所示，当pH = 9. 62左右时体系的RLS信号的増 强较大.在p：^ 9. 62时，JGB自身的RLS强度増大，说明自身发生了聚集，不利于其与黄原胶之间的反 应.如果pH<9. 62或酸度更低的环境下，黄原胶分子中的羧基和羟基上的负电荷被H+中和，与JGB的 结合程度受到削弱，体系的RLS强度降低.
图3酸度对RLS的影响 Fig. 3 Dependence of the RLS intensity on pH
2 2 3 JGB浓度的影响
分别在一定含量的黄原胶溶液中加入不同浓度的JGB溶液.如图4所示，当JGB浓度在1. 6X 10-5 ~ 2 45X10-5mol/L的范围内，随着JGB浓度的增加，A/较稳定，但当JGB浓度大于2. 45X10-5mol/L 时，随着其浓度的增大，A/值减小.通常情况下，浓度为10-3~10-6mol/L的阳离子染料在溶液中有聚集 的特性，并且在该浓度范围内，存在着染料单体与二聚体的动态平衡.溶液中离子型染料的聚集导致二聚 体甚至是高聚体的生成，从而直接影响到染料与其它物质的结合反应及光谱性质[11].由线2可以看出， 当JGB浓度低时，其RLS强度较小，说明主要以单体形式存在，随着染料浓度的进一步增加，RLS强度急 剧增大，说明JGB自身聚合体数目逐渐增多，这与文献10的结果是一致的.线1表示在黄原胶浓度一定的 情况下，随着体系中JGB浓度的增大，体系的RLS的变化情况.当其浓度小于2. 45X10-5mol/L时，体 系的RLS强度随染料浓度的增加而增加，JGB浓度继续增大，则由于自身的聚集程度增加，且自身的吸收 能力增强，导致与黄原胶的反应减弱，体系的RLS的强度开始降低.
224离子强度的影响
JGB黄原胶之间是通过静电引力结合的.由图5可以看出，介质的离子强度的增大，即Na+浓度的增 大将使体系的△/值减小.原因可能是离子氛屏蔽了黄原胶基团上的电荷，使得其与JGB的结合效率减小，
从而降低体系的RLS强度.
2 2 5反应时间和稳定性
通过实验优化条件发现，本实验体系的反应时间为1~5 min体系的稳定时间为4 ~16h.
2 3共存物质的影响
试验了包括金属离子、糖类和蛋白质等物质对黄原胶测定的影响，结果见表1.在误差为±5%的范围 内，体系对金属离子所能允许存在的最大浓度有较大差别，如对Pb2+ Cd2+，Zn2+等能容许存在的最大浓 度较小，而对Ca2+，Ba2+，Mg2+能容许存在的最大浓度则较大.乳糖Lac蛋白质，氨基酸允许的浓度较小.
表1共存物质的影响
Table 1 Effects of Coexists Substances
干扰物质共存物质的最大允许浓度（±5%) /10-6mol . L-1干扰物质共存物质的最大允许浓度（±5%) /10-6mol. L-1
Ca2 + Cl-4 200. 0Zn2+N〇3-10 0
Al3 + SO4-120. 5Na +Cl-1 500 0
Pb2，N〇3-5. 0Ba2 +Cl-240. 0
Cd^ Cl-10. 0NHlCl-60. 0
Mg2，S〇4-300. 0乳糖Lac3. 6
BSA *1. 0HSA *1.4
Glycin3. 0G lu cos e2. 0
注：黄原胶溶液浓度为1. 0Pg- mL-1，JGB浓度为2 2K10-5mol/L pH=9 62.
*单位为Pg. mL-1.
24标准曲线和合成样的分析
在最佳的反应条件下，在328. 5 nm处测定复合物和试剂空白的RLS强度，以（IRLS值对黄原胶的浓 度进行线性拟合，其结果见表2.从表2可知，该方法能够适用于对微量的黄原胶进行测定.表3是根据表 1所提供的物质的干扰状况而合成的样品5次平行测定所得的结果.分析数据令人满意.
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