黄原胶降解菌的筛选

z 1黄原胶降解菌的分离、筛选

经常规分离得到一组能以黄原胶为唯一碳源并使其粘度降低的细菌——黄原胶降解菌，选择降解速 度最快、降粘效果最好的菌株进行试验。试验步骤如下：①配制选择性培养基，在250ml的三角锥形 瓶中装入100ml，灭菌后，将所采集的与黄原胶长期接触的土样取10g，研细后分别加入上述10个锥形 瓶中，搅拌使土样悬浮均匀，在30°C、120r/mm的气浴恒温振荡器中培养，观察黄原胶粘度变化；② 当黄原胶的粘度明显降低后，取1ml混合液，按1:10的比例进行梯度稀释，将稀释好的菌液按1ml 的量加入到灭菌的平板培养皿中，在30C生化培养箱中培养48h，长出单个菌落；③挑取单个菌落分 别接种于液体培养基中，在30C、120r/min的气浴恒温振荡器中培养，观察培养基粘度变化；④选取 黄原胶粘度降低（<5mPa*s)最快的一株菌种（该菌株命名为XDfr1菌株）进行菌种保藏，并进行 后续试验。

22黄原胶降解菌的生长及降粘效果 将父08-1菌株按5%的接 种量接种到黄原胶液体培养基 中，黄原胶降解菌的筛选及紫外诱变选育,置于 30°C、120r/min 的 气浴恒温振荡器中培养，每隔 一段时间测定其粘度和OD_

值，得到粘度和ODs。。的变化 曲线如图1所示。

由图1可以看出，开始阶 段（前12h) XDfr1菌液浓度 几乎没有变化，12h后菌浓度 迅速增大，48h菌浓度趋于稳 定，48〜72h，菌浓度几乎不 变，之后菌浓度逐渐降低。而黄原胶粘度在前12h几乎没有变化，12〜36h之间粘度迅速降至最低 (<5mPa*s);之后则几乎没有变化。这表明，黄原胶粘度的降低与XDB-1菌株的生长基本同步，黄原 胶粘度的降低是XDB-1菌株的作用所致。

3黄原胶降解菌的紫外诱变选育

3.1诱变选育的目的

由于筛选出的XDfr1菌株对黄原胶的作用时间相对较长，在油田实际应用中还存在一定的局限。 试验试图通过紫外诱变，筛选出能在更短时间内能有效降解黄原胶的菌株[7 ]。

3.2紫外诱变选育方法

紫外诱变选育的方法如下：①将筛选出的XDB-1菌株在液体培养基中培养36h后，按1:10的比 例进行梯度稀释，将稀释好的菌液按1ml的量加入到灭菌的培养皿中，然后分别在紫外灯（15W， 20cm)下暴露0. 5、1、2、3、5和10min。将经过紫外线照射的培养皿按常规方法涂黄原胶平板，放入 30°C生化培养箱中培养。②待平板培养48h后，分别挑出其中形状不同的菌落的一部分接种于黄原胶斜 面培养基，在30C恒温生化培养箱培养48h长出菌苔，置于冰箱保存；另一部分接种于液体培养基， 在30C、120r/mm的气浴恒温振荡器中培养，观察培养基粘度变化。③选取黄原胶粘度降低 (<5mPa*s)最快的一株菌（该菌株命名为XDfr2菌株）进行菌种保藏，并进行后续试验。

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石油天然气学报江汉石油学院学报)

2010年10月

3. 3选育菌株的生长及降粘效果 将诱变后的XDB-2菌株 按5%的接种量接种到黄原胶 液体培养基中，置于30°C、

120r/min的气浴恒温振荡器 中培养，间隔_段时间测定其 粘度和〇Ds。。值，得到粘度和 〇Ds。。的变化曲线如图2所示。

由图2可以看出，开始阶 段（前8h) XDB-2菌液浓度 几乎没有变化，黄原胶降解菌的筛选及紫外诱变选育,8〜32h菌浓 度迅速增大，32h后菌浓度几 乎不变，48h菌浓度逐渐降 低。而黄原胶粘度在前8h几乎没有变化，8〜24h之间粘度迅速降至最低（<5mPa*s)，之后粘度几 乎没有变化。这表明，黄原胶粘度的降低与XDB-2菌株的生长基本同步，黄原胶粘度的降低是XDB-2 菌株的作用所致。对比图1、图2可以看出，诱变前后细菌在黄原胶液体培养基中都能很好地生长，但 与诱变前的XDfrl菌株相比，诱变后的XDB-2菌株降解黄原胶的速度明显加快（从36h缩短为24h)。

4结 论

1)黄原胶作为一种生物聚合物，具有可生物降解性，黄原胶降解菌的筛选及紫外诱变选育,能从自然界中筛选出有效降解黄原胶的细菌， 这为黄原胶生物破胶提供了可能。

2) 通过室内试验筛选出一株能有效降解黄原胶的细菌（XDB-1菌株），试验表明它能在36h内将 黄原胶液体培养基的粘度降至最低（<5mPa*s)。而通过进一步的紫外诱变，筛选出一株能在24h有 效降解黄原胶使其粘度降至最低（<5mPa*s)的菌株（XDB-2菌株）。与XDfr1菌株相比，XDfr2菌 株使黄原胶降粘所需时间由36h缩短为24h。这对于加快黄原胶的生物降解，进而应用于含黄原胶的钻 井液、压裂液的低温生物破胶，具有重要意义。