化肥对植物生长具有重要作用，但长期施用助剂会造成水体富营养化，土壤板结，产品品质下降[1]。微 生物肥料是由一种或数种有益活体微生物，特别是 植物根际促生菌（Plant Growth Promoting Rhi- zobacteria，PGPR )组合而成的，借助有益微生物代 谢过程或代谢产物，达到促进植株生长的目的[2?3]。
微生物肥料生产成本低，能显着提高农产品质量和 减少化肥使用量，在农业生产中发挥着越来越重要 的作用。保证微生物肥料中微生物的有效性是制备 微生物肥料的关键[4?6]。
假单胞菌（)是一种常用的PG- PR，可分解葡萄糖、产接触酶、产氧化酶、还原硝酸 盐，可通过联合固氮、溶磷、产生铁载体、产植物激素 等多种机制促进植物生长[7-8]。生物肥料在贮存过 程中，其有效活菌数会逐渐下降，严重影响产品质量 及施用效果，如何提高生物肥料在贮存过程中的活 菌数是提高其施用效果的重要一环。本研究选用的 假单胞菌似）YT3筛选于樱桃根际土 壤，可产细胞分裂素和生长素，对于促进植物根系生 长、活化土壤养分具有积极作用，具备开发微生物肥 料的潜力[9?11]。以YT3为主要组成的复合菌剂 (YT3:乳酸菌：酵母菌=2 : 1 : 1)已证明具有良好 的促生效果[12]。本研究选择多种助剂（碳酸钙、黄 原胶、亲水性白碳黑、氯化钠和羧甲基纤维素钠），研 究了其在复合菌剂贮存90 d后对活菌数的影响，以 期为生物肥料的贮存提供科学依据。
1材料与方法 1.1试验材料复合菌剂（YT3:乳酸菌：酵母菌=2 : 1 : 1); 碳酸钙、黄原胶、亲水性白碳黑、氯化钠、羧甲基纤维 素钠。
1.2试验方案设计1.2.1碳酸钙加人量试验固定加入黄原胶3. 5%，亲水性白碳黑6沁，氯 化钠羧甲基纤维素钠4. 5%。改变碳酸钙加人 量，分别为 1%。、2%。、3%。、4%〇、5%j和 6%〇。
1.2.2黄原胶加人量试验固定加人碳酸钙3%，亲水性白碳黑6%，氯化 钠6%，羧甲基纤维素钠4. 5%^改变黄原胶的加人 量，分别为 1%。、2%〇，3%，4%。、5%。和 6%〇。
1.2.3亲水性白碳黑加入量试验固定加人碳酸钙3%，黄原胶3. 5%，氯化钠 6%，羧甲基纤维素钠4. 5%。改变亲水性白碳黑的 加人量，分别为 3%。、4%〇，5%〇，6%。、7%。和8%〇。 1.2.4氯化钠加人量试验固定加人碳酸钙3%，黄原胶3. 5%，亲水性白 碳黑6%，羧甲基纤维素钠4. 5%。改变氯化钠的加 人量，分别为 3%。、4%〇，5%，6%。、7%。和 8%〇。
1.2.5羧甲基纤维素钠加人量试验固定加人碳酸钙3%，黄原胶3. 5%，亲水性白 碳黑6%，氯化钠6%。改变羧甲基纤维素钠的加人0505050505A5-4-4-3-3-2-2*LL°-C6%〇
5%〇
.F1 .
be7%〇
量，分别为 2%Q、3%，4%，5%。、6%。和7%〇。
1.3试验方法酵母菌、乳酸菌和假单胞菌YT3于豆芽培养基 上活化。酵母菌和YT3挑菌至200ml豆芽培养基， 37°C180rpm下摇菌48h。乳酸菌371下静置培养 72h。用灭菌豆芽培养基调YT3:乳酸菌：酵母菌= 2 : 1 : 1。无菌条件下分装灭菌的三角瓶，同时加入 相应的稳助剂，用灭菌豆芽培养基调节菌液中有效 活菌数为2.7\1080?11/1111，制成。保存90〇1后稀 释涂布豆芽汁固体培养基，测定菌液中的有效活菌 数。
1.4统计分析采用Excel 2007处理数据并制图，采用SAS 8. 〇统计分析软件进行方差分析，LSD法对不同处 理的有效活菌数进行多重比较。
2结果与分析2.1碳酸钙对活菌数的影响混合菌液中加人不同浓度的碳酸钙对菌液中的 有效活菌数产生显着影响（图1)。不同碳酸钙处理 中活菌数的变异系数为35. 97%，在外界条件一致 的条件下，当碳酸钙浓度加入量为3%0时，有效活菌 数的含量最高，达3. OX 108 CFU/ml,分别比其他试 验处理增加了 102. 70%、108. 33%、150. 01%、 66. 67%和74. 42%。当碳酸钙加人量为4%。时，菌 液中的有效活菌数最低，差异显着。
图1碳酸钙浓度对苗液中活菌数的影响2.2黄原胶对活茴数的影响黄原胶浓度对混合菌液中活菌数影响如图2所 示。可以看出，不用黄原胶添加量对活菌数产生显 着影响，不同黄原胶处理中活菌数的变异系数为 45. 39%，当黄原胶的浓度加人量为4%。时，有效活 菌数的含量最高达4. 4X108 CFU/ml，分别比其他 试验处理高出 223. 53%、180. 25%、126. 80%、 7. U%和35. 80%，比初始菌液浓度高出62. 96%。 其次为黄原胶加入量5%。和6%。的试验处理，同另外 3个处理之间差异显着。
1%〇296〇3%〇4%〇
黄原股浓度图2黄原胶浓度对苗液中活苗数的彩响2.3亲水性白碳黑对活菌数的影响图3可以看出，亲水性白炭黑的不同加入量同 样对菌液中的有效活菌数产生显着影响。不同黄原 胶处理中活菌数的变异系数为82. 56%，这说明亲 水性白炭黑的加入量对菌液中的有效活菌数影响非 常大。在外界条件一致的条件下，当亲水性白碳黑 浓度加人量为5%。时，菌液中的有效活菌数的含量 最高达4.0X108 CFU/ml，同其他5个亲水性白碳 黑加人量处理之间差异显着，分别增加了 809.09%、 166. 67%、809. 09%、194. 12%和 127. 27%。加入 3沁和6沁亲水性白碳黑处理的有效活菌数显着最 低。
4.54.03.女U3.02.52.0槭1.51.00.50.0C[~13%〇4%〇5%〇6%〇
亲水性白炎黑浓度图3亲水性白炭黑浓度对菌液中活菌数的影响 2.4气化钠对活菌数的彩响氯化钠对菌液中的有效活菌数影响差异达显着 水平（图4)。不同氯化钠处理中活菌数的变异系数 为55. 96%，在外界条件一致的条件下，当氯化钠浓 度调整为为8沁时，菌液中的有效活菌数的含量最 高为2. 32X108 CFU/ml，分别比其他5个氯化钠加 人量处理高出了 544. 44%、262. 50%、13. 73%、 56. 76%和71. 85%。虽然加人8%0时活菌数有一定 程度提高，但是同加人5%。时差异不显着，因此，从 经济角度考虑，氯化钠加人5%。为宜。
-0-5-0-5 2-L L0-(i&solx)^48^4%〇
3%〇
8%〇
7%>0.05%〇6%〇
气化钠浓度图4氯化钠浓度对菌液中活菌数的影响2.S羧甲基纤维素钠对活茴数的影响混合菌液中加人不同浓度的羧甲基纤维素钠对 菌液中的有效活菌数产生显着影响。不同羧甲基纤 维素钠处理中活菌数的变异系数为36. 22%，在外 界条件一致的条件下，当竣甲基纤维素钠浓度加人 量为5%。时，有效活菌数的含量最高达3. 72X108 CFU/ml，分别比其他试验处理增加64. 60%、 30. 99%、55. 09%、210. 12%和 102. 17%。羧甲基 纤维素钠加入量为6%?)的试验处理有效活菌数显着 最低。
0.02%〇3%〇4%〇5%〇6%〇796〇
羟曱基纤维素钠浓度图S 羧甲基纤维素钠浓度对苗液中活菌数的彩响3结论混合菌液中(假单胞菌：乳酸菌：酵母菌=2 : 1 :1)添加不同浓度的助剂（碳酸钙、黄原胶、亲水性 白碳黑、氯化钠和羧甲基纤维素钠)均可对有效活菌 数产生显着影响。不同助剂对活菌数影响顺序为亲 水性白碳黑 > 氯化钠 > 黄原胶 > 竣甲基纤维素 钠 > 碳酸钙。碳酸钙和黄原胶的单因子试验结果 认为，两助剂的适宜添加比例分别为3%。和4%^而 亲水性白碳黑、氯化钠和羧甲基纤维素钠的适宜添 加比例均为5%。将初始菌液有效活菌数浓度调整 为2. 7X108 CFU/ml,菌液在保存至第90 d时的有 效活菌数浓度均高于2.0 X108CFU/ml，符合微生物肥料行业质量标准[13]。